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研究課題
流行域が拡大しつつあるエキノコックス症の監視・防遏に関する研究（１９９９） 主任研究者（所属機関） 金澤保（産業医科大学医学部） 分担研究者（所属機関） 伊藤亮（旭川医科大学医学部）、小山田隆（北里大学獣医畜産学部）、神谷正男（北海道大学大学院獣医学研究科）、神谷晴夫（弘前大学医学部）、木村浩男（北海道立衛生研究所、1999年4月-1999年6月）、高橋健一（北海道立衛生研究所）、田村正秀（北海道立衛生研究所、1999年7月-2000年3月）、土井陸雄（横浜市立大学医学部） ＜抄録＞ 研究目的 次の3項目の研究を行う。1.本州におけるエキノコックス症に関する疫学調査。2.終宿主の感染状況に関する基礎的研究及びエキノコックス症感染源対策の試み。3.エキノコックス症診断に関する研究及び薬剤治療の基礎的研究。以上の項目の中にさらに小項目をたて、最終的に国内のエキノコックス症を監視する上で基礎となる情報を収集し、かつ防遏対策に資する新たな方法や技術開発を行うことを目的とする。 研究方法 1.本州におけるエキノコックス症の疫学調査。A）動物調査:青森県内においてエキノコックスの終宿主となりうる野生動物を捕獲し、剖検により感染状況調査を行った。同様の調査を関東地方においても行った。食肉検査場で処理されるブタやウシなどの肝臓についても検査を行った。B）患者調査:国内で北海道以外に居住している人のエキノコックス症報告例を収集し疫学的な解析を行った。 2.終宿主の感染状況に関する基礎的研究及びエキノコックス症感染源対策の試み。A）終宿主動物糞便からの多包条虫DNA検出の試み:イヌ糞便に原頭節抗原を添加し多包条虫種特異的DNA検出を試みた。B）感染源対策の試行:道東の小清水町において駆虫薬入りベイトをキツネ巣穴周辺に散布し糞便内抗原検出法と虫卵検査法を併用し感染率の推移を経時的に観察した。根室市内においてもベイトを道路沿いに散布する方法を試みた。C）農村地帯と都市部におけるキツネの感染状況の比較:道東と札幌市街化区域に生息するキツネの感染率を糞便内抗原検出法と虫卵検査法によって検討した。D）飼いイヌ及び飼いネコの感染状況調査:糞便内抗原検出法を用い、一般から検査依頼のあった検体を対象に検査を実施した。併せて飼い主に対しエキノコックスに関する知識や関心の程度に関しアンケ-ト調査を行った。E）生活環境中のエキノコックス虫卵検出法の開発と応用:ナイロンメッシュと比重差を利用しエキノコックス虫卵を室内塵、あるいは水中から検出する方法を開発し、フイ-ルドから虫卵の検出を試みた。F）スナネズミのエキノコックス症代替動物としての有用性の検討:スナネズミの免疫担当細胞に対するモノクロ-ナル抗体産生ハイブリド-マを作成しスナネズミの終宿主、中間宿主動物モデルとしての可能性を検討した。 3.エキノコックス症診断に関する研究及び薬剤治療の基礎的研究。A）Em-18抗原を用いたヒト多包虫症特異的血清診断法の開発と、これを応用した単包虫症及び有鉤嚢虫症との鑑別診断法の検討:Em-18抗原を用いたウエスタンブロット法とELISA法を開発し特異性、感度を検討した。単包虫包虫液と有鉤嚢虫嚢虫液より診断用抗原を精製し、鑑別診断法を検討した。B）ヒト肝多包虫症抗体応答モデル動物の確立:4系統のマウスを用い多包虫感染後の抗体応答をELISA法とウエスタンブロット法で検討した。C）遺伝子診断法の開発と改良:北海道株多包条虫のミトコンドリア12SrRNA遺伝子塩基配列を決定し遺伝子診断法としての可能性を検討した。 結果と考察 1.本州におけるエキノコックス症の疫学調査:青森県及び関東地方で捕獲した野生動物からエキノコックスを見出すことはできなかった。しかしながら、青森県東部のある養豚場で肥育された3頭のブタの肝臓に多包虫の感染を確認した。この事実から直ちにエキノコックスの汚染が本州に拡大したと結論することはできないものの、その可能性が高くなったと考える。本州以南から76症例の多包虫症患者の報告があり、そのうち19症例は感染地が不明であった。その多くは青森県に集中していた。エキノコックスが本州に存在する事を証明するには感染している野生動物の発見が必須である。そのため今後とも調査の継続が望まれる。 2.終宿主の感染状況に関する基礎的調査研究及びエキノコックス症感染源対策の試み:糞便内抗原検出法の開発により従来は剖検によって確認していた感染の有無を動物を殺す事なく調査する事が可能となった。一連の調査から本法を用いて少数ではあるがエキノコックスに感染したイヌが見出された。飼いイヌの人への感染源としての危険性は高い。そのため北海道の飼いイヌの感染状況調査は緊急に行われる必要があると考える。北海道から本州その他へ移動するイヌについては検査を義務づける等の対策を検討する必要がある。北海道ではキツネの感染率が上昇していることが報告されているが、人口の集中している市街地及び都市近郊のキツネの感染率も高いことが明らかとなり、エキノコックスが人へ感染する危険性が以前にも増して高まっている。このような状況にあってキツネの感染率を低下させる感染源対策は緊急の課題である。駆虫薬を入れたベイトをキツネ巣穴周辺あるいは道路端に散布する方法を試みたところ、駆虫薬入りのベイトを散布した地域のキツネの感染率が有意に低下する事が観察された。エキノコックス症の感染源を絶つ一つの方法として期待できる。 3.エキノコックス症診断に関する研究及び薬剤治療に関する基礎的研究:多包虫原頭節から精製したEm-18抗原と単包虫包虫液から生したantigenBSU、有鉤嚢虫嚢虫液から精製した糖蛋白を用いると多包虫症と近縁疾患であるこれらの疾患と遺伝子診断法の応用価値は高い。 結論 1:今年度も青森県及び関東地方の野生動物からエキノコックスを見出すことはできなかった。 2:青森県で多包虫に感染したブタ3頭を発見した。 3:本州においてエキノコックス症の流行を監視するシステムとして食肉検査所のブタを調査する方法が有力である。 4:多包条虫に感染した飼いイヌが発見された。 5:駆虫薬入りのベイトを野外散布する方法は感染源対策として有力である。 6:環境中の虫卵汚染を調査する方法を検討した。 7:Em-18抗原に対する血清抗体価は治療後低下する。そのため治療後の経過観察に利用できる。 8:遺伝子診断法が検討された。 9:多包（条）虫症の終宿主、中間宿主動物モデルを検討した。 TOPへ 研究課題 流行域が拡大しつつあるエキノコックス症の監視・防遏に関する研究（１９９８） 主任研究者（所属機関） 金澤保（産業医科大学医学部寄生虫学・熱帯医学教室） 分担研究者（所属機関） 神谷正男（北海道大学大学院獣医学研究科）、伊藤亮（旭川医科大学）、神谷晴夫（弘前大学医学部）、土井陸雄（横浜市立大学医学部）、木村浩男（北海道立衛生研究所）、小山田隆（北里大学獣医畜産学部）、内田明彦（麻布大学環境保健学部）、 ＜抄録＞ 研究目的 エキノコックス症は1960年代に根室地域で患者の発生がみられた後、短期間のうちに北海道全域が流行域となった。しかしながら、本症制圧に有効な対策は何か、いまだ暗中模索しているのが現状である。このような状況にあって、本研究は、エキノコックス症が人畜共通感染症である点を重視し、媒介動物とヒトとを研究対象とし、本症の監視・防遏に資する基礎的な情報と知見の収集、および技術の開発を目的としている。その内容は、疫学的研究、感染源対策的研究およびエキノコックス症の診断治療に関する研究の三点にまとめることができる。 研究方法 北海道においては定点監視地区において昨年度に引き続き媒介動物の感染状況調査を行った。さらに飼い犬（一部飼い猫）の感染状況も糞便内抗原検出法により調査をおこなった。本州においては関東地方南部、青森県東部地域において野生動物を捕獲し、剖検により感染状況調査を行った。本州以南で発生が報告されている多包虫症の患者について感染地、感染推定年、性別等の疫学情報の検討を行った。感染源対策として、北海道の定点監視地区において駆虫薬を混じた餌をキツネ巣穴周辺に散布し、キツネの感染率の推移を調査した。特に餌の種類、駆虫薬の混じ方等の基礎的な検討を行った。エキノコックス症の動物実験モデルの開発を目指し、モルモットを用い抗マクロファ-ジ、抗T細胞モノクロ-ナル抗体を投与し感染抵抗性の解析を行った。エキノコックスと血清学的に近縁な疾患である有鉤嚢虫症の血清学的鑑別法について、前者ではEm18抗原を、後者では特異抗原の分離を等電点電気泳動法を用いて検討した。invitroで殺エキノコックス作用が観察された中国伝統生薬の二剤、竹茹と黄符について、エキノコックス感染スナネズミを用いてinvivoの実験を行った。 結果と考察 定点観察地においてキツネのエキノコックス感染率の年変化を引き続き観察しているが、季節に関係なく一年間を通してエキノコックス感染を認めた。飼い犬345頭、飼い猫17頭を糞便内抗原検出法で検査したところ、それぞれ7頭と1頭が陽性であった。関東地方南部においてホンドキツネ18頭、ホンドタヌキ59頭およびノネズミ2種、合計349頭、その他の野生動物257頭を捕獲し検査したがエキノコックス感染動物を見い出すことはできなかった。青森県東部地域においてはノネズミ7種、合計577頭を、ホンドギツネ14頭、ホンドタヌキ31頭、ホンドイタチ8頭およびニホンリス1頭を捕獲し検査したがエキノコックス感染動物を見いだすことはできなかった。今迄の調査からは本州においてエキノコックス感染動物は見い出されていない。しかしさらに検査頭数を増やし引き続き調査を行う予定である。本州以南から76例の多包虫症患者の発生が確認できた。そのうちわけは海外（千島列島、樺太）での感染が推定される症例30例、北海道内での感染が推定される症例23例、本州以南で感染したと推定される症例19例、感染地不明症例4例であった。エキノコックス感染源対策としてフイ-ルドに駆虫薬を混じた餌の散布を行い感染率の推移を観察した。キツネによる餌の接食率は50%以下であった。以上のことよりキツネが接食しやすい餌についての検討が必要であると思われた。駆虫薬を混じた餌を投与された地区に棲息しているキツネではエキノコックス感染率の低下が一時的に観察された。しかし駆虫薬投与をやめると短期のうちに元の感染率まで上昇した。このことからキツネでは容易に再感染が起こっていることが推定された。今後、駆虫薬を混じた餌の投与時期、投与後のモニタ-法などに更なる検討が必要である。大規模に行うことになると費用-効果の観点からも検討が加えられねばならい。F344ラットではエキノコックス感染後の血清抗体の出現パタ-ンがヒトの場合と類似しており、ヒトのエキノコックス感染モデルとして応用できるものと考えられた。モルモットにモノクロ-ナル抗体を投与しても感染抵抗性の減弱を観察できなかった。ヒトの多包虫感染を血清学的に鑑別する方法は、Em18抗原を用いると感度、精度ともに優れた検査を行えること、有鉤嚢虫症との鑑別診断は有鉤嚢虫の抗原を等電点電気泳動法で分離できる糖タンパクを用いれば可能であることが示唆された。invitroで殺エキノコックス作用が観察された竹茹と黄符をエキノコックス感染スナネズミに投与した。しかしエキノコックスの発育抑制効果は認められなかった。薬剤の投与方法、投与時期についてさらなる検討が必要と思われた。 結論 昨年度に引き続き、今年度も順調に当初の計画に則って研究が遂行されている。2年目としては満足すべき成果が出ていると思われる。本州におけるエキノコックス患者の発生動向調査を完了できた。本州以南から報告されているエキノコックス症患者の中に原発症例は確かに存在している。一方、媒介動物調査を積極的に行っているがエキノコックス感染動物を見い出すには至っていない。そのためエキノコックスの生活環が本州以南に存在するか否かは不明といわざるをえない。北海道でエキノコックス感染が疑われる飼い犬や飼い猫が今迄考えられていたよりも多く存在する可能性がでてきた。この事実はエキノコックス症の予防対策上大きな問題となると思われる。最終年度も調査を続行するが調査結果に注目したい。感染源対策的研究が、技術的な問題が残されているにせよ、実際のフイ-ルドを用いて開始されたことは特筆される。これには、昨年度の研究成果である糞便内抗原検出法の開発が基礎となっていることを強調しておく。北海道内のエキノコックス症をコントロ-ルするには感染源対策が必須であるという点に関して当研究班内では意見の一致をみている。さらなる情報の蓄積、技術面での検討が最終年度の重要課題となる。エキノコックス症および近縁疾患との血清学的鑑別診断法がほぼ確立されたことも大きな成果である。ヒュ-マンサイエンス財団の新興・再興感染症研究推進事業のうち海外委託研究によって得られた寄生虫材料および血清試料が本研究の遂行に大きく貢献していることを付記する。本疾患が感染症新法で第4類感染症となったことから、国内での検査システムの整備が必要である。エキノコックス症の血清検査センタ-的機能を、北海道立衛生研究所の他に、旭川医科大学寄生虫学教室が整備し、全国からの検査依頼に対応できる体制がつくられた。さらに国立感染症研究所獣医科学部人獣共通感染症室でも検査できる体制を作りつつある。エキノコックス症に有効な薬剤開発に関する基礎的研究は進捗状況に遅れがみられる。最終年度の成果に期待したい。 TOPへ 研究課題 流行域が拡大しつつあるエキノコックス症の監視・防遏に関する研究（１９９７） 主任研究者（所属機関） 金澤保（国立感染症研究所） 分担研究者（所属機関） 伊藤亮（岐阜大学医学部）、小山田隆（北里大学獣医畜産学部）、神谷晴夫（弘前大学医学部）、神谷正男（北海道大学大学院獣医学研究科）、木村浩男（北海道立衛生研究所）、土井陸雄（横浜市立大学医学部） ＜抄録＞ 研究目的 多包性エキノコックス症は世界的に流行域が拡大しつつある。わが国も決して例外ではなく短期間のうちに北海道のほぼ全域が流行地となったことは周知のことであり、今では本州への伝播が懸念されるまでに至った。本研究は本症の予防対策に資することを主たる目的とし以下の三点に重点をおくものである。1）疫学的研究:1.主に本症の重要な媒介動物であるキタキツネの生態、感染状況調査を行なう。2.本州に既に多包性エキノコックスが侵入しているか否かの調査および監視体制を構築する。3.ブタの血清疫学調査法の基礎的検討を行なう。2）感染源対策的研究:1.本寄生虫の終宿主となりうる動物としてネコを用いた感染実験を行なう。2.キツネ、イヌ等の終宿主に対する予防法としてワクチン開発を視野に入れた基礎的研究を行なう。3.終宿主の感染を判定する簡便な検査法の開発を行なう。3）本症の診断・治療に関する研究:1.本症の病態を解析するモデル動物の検討を行なう。2.特異的血清診断法の開発を行なう。3.本症に有効な薬剤開発を目指した基礎的研究を行なう。 研究方法 1）疫学的研究:1.本年度は春から秋にかけてのキタキツネの感染状況の調査、都市部、農村部のキタキツネの感染状況に関して調査検討を行なった。前者では北海道根室市で捕獲した36頭のキタキツネを検査対象とし、解剖によって感染率、感染虫体数を明らかにした。後者では都市部として札幌市、農村部として小清水を調査地とし、それぞれの地域でキタキツネの巣穴周辺において糞便を採取し感染の有無を検便法、さらにはサンドイッチELISA法を用いた糞便内虫卵抗原検出法によって判定した。2.本州においては青森県内と関東地方において終宿主および中間宿主となりうる動物を収集し解剖検査によって本寄生虫の存否を調べた。青森県においてはさらに屠場においてブタ、ウシの肝臓について本寄生虫の感染の有無を調査した。3.ブタ血清疫学調査を行なうにあたり基礎的な検査法についてELISA法で検討した。2）感染源対策的研究:1.ネコに原頭節15万隻感染させ感染後37日、47日目に解剖検査を行なった。2.マウスに原頭節を感染させ、イヌ血清と共通した免疫応答を解析検討した。3.疫学調査において糞便内虫卵抗原検出法を実際に応用し有効性を検討した。3）本症の診断・治療に関する研究:1.F344ラット、ブタ、モルモットを用いて検討した。F344ラットにおいてはウエスタンブロット法で抗体産生パタ-ンを解析した。ブタ、モルモットの腸管脈静脈から本寄生虫を感染させ感染抵抗性について検討した。2.Em18を用いたウエスタンブロット法を世界各国から収集した本症ならびに近縁寄生虫疾患の患者血清について感度、特異性について検討を加えた。3.中国伝統薬物のなかから本寄生虫のgerminalcellに障害性のある薬物をMTTを応用した方法を用いて検討した。 結果と考察 1）1.春から秋にかけてもキタキツネに本寄生虫の感染はみられ、特に幼獣においては多数の虫体が寄生がしていた。その年に生れた幼獣であっても6月には既に感染が確認された。従来得られているキタキツネの感染デ-タは冬季に捕獲されたキツネについての情報であった。今回の研究調査によって春から秋までの感染状況の一端が明らかにされた。札幌市内のキツネにおいても15%の感染が認められ農村部に比較すれば低いものの都市住民にも感染の危険が恒常的に存在することが示唆された。2.青森県内において終宿主となりうるキツネ等の野生動物を合計93頭、中間宿主となりうるネズミ等の野生動物を556頭を解剖調査したが感染を認めた個体はなかった。また青森県内の屠場においてウシ280、ブタ6500頭の主に肝臓を検索したが感染個体を認めなかった。関東地方においてはキツネ20頭を解剖調査したが感染個体を認めなかった。以上から今年度の調査では青森県および関東地方に本寄生虫が侵入していることは確認されなかった。さらに調査個体数を増やさねばならないことは当然であるが。それに加え恒常的な監視体制を構築することも将来的に必要なことであるため効率のよい方法について検討をしていく必要がある。2）感染源対策的研究:1.ネコにおいて成虫の感染が成立するのはきわめて少数であるため、イヌに比べ終宿主としての役割は低いものと考えられた。しかし虫卵を形成するまでに発育した寄生虫を認めたことから全く安全であるとはいえない。ペット動物として人間と密接な関係にあるネコの終宿主としての役割についてはさらなる検討が必要である。2.マウスにおいてイヌと同様の免疫応答があることを確認した。これらの免疫応答が成虫寄生の感受性あるいは抵抗性を説明できるか否かさらなる検討が必要である。3）本症の診断・治療に関する研究:1.人間の病態に近い動物モデルを得ることは診断・治療の研究を進めるにあたり必要なことである。感染の進展にともなう抗体産生、治療後の抗体産生の変化を解析するのにはF344ラットが人間の場合に類似していることが判明し、この方面の研究に応用できる可能性が示唆された。2.Em18enrichedfractionを用いることで本症の特異的血清診断が可能であることが明らかにされた。3.二種の薬剤（黄符、竹茹）にgerminalcell障害作用があることが推定され今後の研究の展開が期待される。 結論 1.キタキツネには年間を通して感染がみられること、都市部のキツネにおいても感染が認められること等から感染源としてのキタキツネの重要性を今以上に認識する必要がある。 2.青森県と関東において野生動物のエキノコックス流行調査を行なったが現時点では幸いにして感染動物を認めなかった。 3.ネコの終宿主としての役割はイヌに比べ低いと思われるがさらなる検討が必要である。 4.本症の病態を解析するためにいくつかの動物モデルが検討された。 5.Em18enrichedfractionを用いることにより本症の特異的血清診断が可能である。 6.黄符、竹茹にinvitroの系においてgerminalcell障害作用が観察された。 TOPへ |